怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能？
為確保Waters ACQUITY BEH色譜柱始終保持理想性能，請(qǐng)遵循以下原則：
a. 樣品前處理
1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。
2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)擬用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相來(lái)制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。
3. 如果樣品不溶于流動(dòng)相，請(qǐng)確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖鹽析出。
4. 用0.2 _m濾膜過(guò)濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇等），請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。或者，可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>
5. 對(duì)于親水作用色譜(HILIC)分離，樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備（例如95%乙腈）。請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。
b. pH范圍
ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下：采用BEH C18、BEH C8和BEH苯基填料為1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料為2~11；采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。
c. 溶劑
為了保持理想的色譜柱性能，請(qǐng)使用高品質(zhì)色譜級(jí)溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2 _m濾膜過(guò)濾。推薦使用PallGelman Laboratory Acrodisc®過(guò)濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑
通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板，這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大，性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。
d. 壓力
ACQUITY BEH色譜柱能夠承受高達(dá)18000psi（1241 bar或124 MPa）的操作壓力。
注：在壓力、pH和/或溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。
e. 溫度
為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，ACQUITYBEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20 °C~90 °C。在高pH條件下操作時(shí)，建議降低操作溫度以延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。在較高
溫度下（如70 °C以上）運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中，BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用，不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題（請(qǐng)參閱“BEH Amide色譜柱入門"章節(jié)的推薦條件）。
表2.使用ACQUITY BEH色譜柱時(shí)的推薦緩沖鹽
添加劑/緩沖液 | pK, | 緩沖液范圍 | 揮發(fā)性(±1個(gè)pH單位) | 能否用于質(zhì)譜 | 注釋 |
TFA | 0.3 | — | 揮發(fā)性 | 可用 | 離子對(duì)添加劑，能抑制MS信號(hào)， 在0.02%~0.1%范圍內(nèi)使用。 |
乙酸 | 4.76 | — | 揮發(fā)性 | 可用 | 與醋酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。 在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。 |
醋酸鹽(NH3 CH3CO2) | 3.75 | — | 揮發(fā)性 | 可用 | 與甲酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。 在0.1%~ 1.0%范圍內(nèi)使用。 |
甲酸鹽(NH4HCO2) | 4.76 | 3.76-5.76 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在1~10 mM范圍內(nèi)使用。 注:其鈉鹽或鉀鹽無(wú)揮發(fā)性。 |
磷酸鹽1 | 3.75 | 2.75-4.75 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在1~10 mM范圍內(nèi)使用。 注:其鈉鹽或鉀鹽無(wú)揮發(fā)性。 |
磷酸鹽2 | 2.15 | 1.15-3.15 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | 常用的低pH緩沖液，具有良好的UV透光性。 |
磷酸鹽3 | 7.2 | 6.20-8.20 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。 |
4-甲基嗎fei啉 | 12.3 | 11.3-13.3 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。 |
氨水(NH4OH) | ~8.4 | 7.4-9.4 | 揮發(fā)性 | 可用 | 通常在10mM或更低濃度下使用。 |
碳酸氫銨 | 9.2 10.3(HCO3-) 9.2 (NH4+) | 8.2-10.2 8.2-11.3 | 揮發(fā)性 揮發(fā)性 | 可用 可用 | 在5~10mM范圍內(nèi)使用(進(jìn)行MS分析時(shí)，需保持源溫度> 150°C)。用氨水或醋酸調(diào)節(jié)pH值。pH=10時(shí)具有良好的緩沖容量。 注:請(qǐng)使用碳酸氫銨(NH,HCO),而不是碳酸銨(INH4)2CO3)。 |
醋酸銨 | 9.2 | 8.2-10.2 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在1~10 mM范圍內(nèi)使用。 |
甲酸銨 | 9.2 | 8.2-10.2 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在1~10 mM范圍內(nèi)使用。 |
硼酸鹽 | 9.2 | 8.2-10.2 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | 需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。 |
CAPSO | 9.7 | 8.7-10.7 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | 兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10 mM范圍內(nèi)使用。氣味小。 |
甘氨酸 | 2.4, 9.8 | 8.8-10.8 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | 兩性離子緩沖液，相較于硼酸鹽緩沖液更有助于延長(zhǎng)色譜柱壽命。 |
1-甲基哌啶 | 10.2 | 9.3-11.3 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在1~10 mM范圍內(nèi)使用。 |
CAPS | 10.4 | 9.5-11.5 | 非揮發(fā)性 | 不可用 | 兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10mM范圍內(nèi)使用。氣味小。 |
三乙胺(用作醋酸鹽) | 10.7 | 9.7-11.7 | 揮發(fā)性 | 可用 | 在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。僅當(dāng)使用乙酸滴定時(shí)具有揮發(fā)性(使用鹽酸或磷酸滴定時(shí)無(wú)揮發(fā)性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作離子對(duì)試劑。 |
吡咯烷 | 11.3 | 10.3-12.3 | 揮發(fā)性 | 可用 | 溫和型緩沖液，可延長(zhǎng)柱壽命。 |
注：在pH、溫度和/或壓力的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。
