1.色譜柱信息

  InertSustain NH2液相色譜柱是在我公司研發的ES新型硅膠基質上鍵合氨丙基的色譜柱，正相分離模式適合用于維生素等脂溶性化合物的分離，如果用于HILIC分離模式，可以用于強極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離。InertSustain NH2液相色譜柱從硅膠基質的合成，到化學處理和裝填后的性能檢測，都是在本公司嚴格的產品控制下進行，因此不同批次的柱與柱之間具有優異的重現性；通過獨有的裝填技術填裝的NH2柱柱床密度均一穩定，從而確保色譜柱具有高柱效，目前NH2柱用于HILIC(親水性作用，用于反相系統)模式分離的情況愈來愈多，在極性和親水性化合物如糖類、有機酸、有機堿、氨基酸、多肽水解物等的分離過程中，可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長期保持InertSustain NH2液相色譜柱的優越性能和正確的使用色譜柱，在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書。

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝，檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規格、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為正己烷/乙醇=98：2，v/v。

3.色譜柱填料規格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中，兩端用堵頭密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統時，首先請確保系統中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶，請采用一種能夠與系統及色譜柱都能互溶的溶劑(e.g.異丙醇)對系統進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統中，并注意流動相的方向要與柱上標記的方向保持一致。我公司提供的常規液相色譜柱標準接頭型式為

1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖)，同時還有耐高壓液相系統的UP型(如下右圖)(目前NH2柱暫不提供UPLC柱)。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

  色譜柱連接好之后，請確認無漏液現象之后再進行后續操作。

  新的NH2柱是保存在正己烷/乙醇(98：2，v/v)的溶液中，在儲存和運輸過程中，硅膠填料可能會干涸，如果用于正相分離模式，正相柱的平衡時間一般較長，直接用正己烷/乙醇(98：2，v/v)沖洗50倍柱體積活化，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速，然后用流動相平衡之后再進樣分析；如果用在反相系統中分離，推薦用至少50倍柱體積異丙醇過渡(注意接色譜柱之前，用二通代替色譜柱連接系統，用異丙醇將系統包含進樣器部分徹底清洗，除水完全之后，再連接色譜柱)，再用純的乙腈沖洗20倍柱體積對色譜柱進行平衡，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速，然后用不含緩沖鹽的流動相進行平衡20倍柱體積，再用流動相平衡，待壓力和基線穩定之后，再進樣分析。(如果在活化過程中即發現壓力和基線不正常時，請及時聯系我公司工程師處理。)

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞，所有樣品及溶劑，包括緩沖溶液在內，在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾。在正相色譜中，固定相的水分含量常常是影響選擇性的關鍵因素，大部分溶劑都內含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w)，如發現色譜柱保留性能發生變化，可用流動相低流速長時間充分平衡。

HILIC模式分離中，樣品溶劑需要含60-100%的有機溶劑，水的比例應盡量小，推薦5%的水作為自動進樣器的清洗液。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽，因為即使再很高比例的有機溶劑中它們也有很好的溶解性。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽，以防析出堵塞色譜柱。對于大多數分析樣品，推薦的緩沖鹽濃度為5-20mM。避免使用其他非揮發性緩沖鹽、TFA或者離子對試劑，它們會干擾HILIC分離機理，并抑制MS信號。通常的HILIC應用中，一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽，如甲酸鹽、乙酸鹽或者它們的酸作為流動相。流動相使用前請務必進行脫氣。

6.色譜柱的保養

●pH NH2柱可在pH2~7.5范圍內使用，為保持色譜柱良好的壽命，請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱。

●耐壓 常規柱耐受壓力為20MPa，HP系列耐壓為50MPa，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復的損害，因此系統壓力升高之后，建議盡快排查系統，如果是色譜柱壓力升高，請及時采用適當溶劑沖洗色譜柱。

●溫度 最高操作溫度為60℃，長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

正相模式清洗步驟：

1.每次清洗都用低流速起步，當檢測到柱壓穩定在一定水平后再增加流速；

2.先用10倍柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等沖洗色譜柱；3.用50柱體積的諸如乙酸乙酯，二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強溶劑沖洗色譜柱。

HILIC模式清洗步驟：

1.如果是采用緩沖鹽流動相的情況下，做樣之前請務必用比緩沖鹽稍高比例的水充分過渡，然后再用流動相平衡；2.每天做樣完畢之后，應充分沖洗色譜柱，首先用稍高比例的水相沖洗，例如乙腈/水=60：40(v/v)沖洗20倍柱體積，然后用乙腈/水=95：5(v/v)沖洗20倍柱體積，然后保存在這個流動相下。

●儲存 色譜柱長期不用，建議沖洗方法完成之后，正相分離模式保存在與出廠封存溶劑相同的流動相中；HILIC 分離模式保存在存純乙腈中，之后卸掉色譜柱，兩端用堵頭密封，并放在溫度變化小的場所。